酶法制备低分子量肝素及其活性研究

摘要

用肝素酶Ⅰ(heparinaseⅠ,EC 4.2.2.7)对肝素进行控制性降解,分别在反应16,32,48 h终止反应,超滤离心粗分级后,用Bio-Gel P6低压柱色谱分离纯化,得到3组不同分子量范围的肝素寡糖混合物。用生色底物法和羊血浆法测定抗Ⅹa活性和抗Ⅱa活性。不同反应时间得到的肝素寡糖的抗Ⅹa和抗Ⅱa活性分别为82.4/40.3、21.5/11.8和5.6/4.5 IU/mg,其抗Ⅹa/抗Ⅱa活性值分别为2.04、1.82和1.24。结果表明降解16 h所得寡糖可供制备符合小分子肝素药物质控要求的产品。