条斑紫菜锰超氧化物歧化酶原核表达及多克隆抗体制备

摘要

研究紫菜抗逆的分子机制,将本实验室克隆的条斑紫菜(Porphyra yezoensis Ueda)锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn SOD)基因全长cDNA克隆到质粒pET-30c(+)中,构建原核表达载体pET-S,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达Mn SOD,表达产物的分子量约为30 KDa.利用不同浓度的Mn~(2+)诱导重组Mn SOD的表达,可以检测到比活力随Mn~(2+)浓度增高而上升的趋势.用重组Mn SOD免疫新西兰大白兔,制备了多克隆抗体,多克隆抗体的效价为1∶8 000.免疫印迹实验(Western Blot)表明该多克隆抗体具有很好的特异性.