miRNA-9-5p通过靶向调控notch受体2对食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响研究

摘要

cqvip:目的探讨微小RNA-9-5p(miRNA-9-5p)通过靶向调控notch受体2(NOTCH2)对食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-9-5p在食管癌组织、食管癌患者血清和食管癌细胞株TE-1、ECA109、KYSE410及人正常食管上皮细胞株HEEC中的表达水平。构建miRNA-9-5p过表达的KYSE410细胞株,分别采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell小室实验检测miRNA-9-5p过表达对KYSE410细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。通过生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-9-5p和NOTCH2的靶向关系,采用RT-PCR检测食管癌细胞中NOTCH2 mRNA的表达水平,采用Western blot检测食管癌细胞中NOTCH2蛋白表达水平。在miRNA-9-5p过表达的KYSE410细胞中转染pcDNA3.0-NOTCH2过表达载体质粒后,观察上调NOTCH2对miRNA-9-5p过表达的KYSE410细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果食管癌组织和食管癌患者血清中miRNA-9-5p的表达水平均低于癌旁正常组织和健康体检者(P﹤0.05),食管癌组织中NOTCH2 mRNA的表达水平高于癌旁正常组织(P﹤0.05)。相关性分析结果显示,食管癌组织中miRNA-9-5p与NOTCH2 mRNA的表达呈负相关。与HEEC细胞相比,TE-1、ECA109和KYSE410细胞中miRNA-9-5p的表达水平均降低,而NOTCH2的mRNA和蛋白表达水平均升高(P﹤0.05),且KYSE410细胞变化最为显著。miRNA-9-5p过表达能够抑制KYSE410细胞的增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶基因实验检测结果证实NOTCH2是miRNA-9-5p的靶基因,RT-PCR和Western blot检测结果显示,miRNA-9-5p可负向调控NOTCH2的表达。上调NOTCH2的表达能够促进miRNA-9-5p高表达的KYSE410细胞的增殖、侵袭和迁移。结论miRNA-9-5p在食管癌中低表达,其过表达可通过靶向调控NOTCH2抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭。