TTF-1过表达抑制肺腺癌A549细胞增殖和上皮-间质转化

摘要

cqvip:目的探讨甲状腺转录因子-1(TTF-1)基因过表达能否抑制肺腺癌A549细胞增殖和上皮-间质转化(EMT)。方法将TTF-1基因的编码序列(CDS)克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro慢病毒载体,构建TTF-1过表达慢病毒载体,在293T细胞内包装为TTF-1基因过表达的慢病毒颗粒,转染至肺腺癌细胞A549;用iCelligence实时无标记细胞功能分析仪检测TTF-1转染组(LV-TTF1)、空载体组(vector)及未转染组(NC)3组A549细胞增殖水平;3组细胞分别予TGF-β1刺激后,观察细胞的形态变化,RT-qPCR法检测EMT相关标记物表达水平的改变,细胞划痕及Transwell迁移实验法检测细胞转移能力的变化。结果RT-qPCR及Western Blot结果显示,成功构建TTF-1过表达A549肺腺癌细胞系;iCelligence结果显示,与vector、NC组相比,LV-TTF1组细胞增殖水平降低;LV-TTF1组细胞经TGF-β1刺激后,未发生明显的EMT形态学变化,而vector、NC组细胞形态变化明显;LV-TTF1组细胞中E-cadherin mRNA表达量较NC明显上升(P<0.05),Vimentin mRNA的表达明显降低(P<0.05);划痕实验中LV-TTF1组的细胞迁移率