TILLING技术应用于家蚕化学诱导突变检测的体系优化

摘要

TILLING(Targeting Induced Local Lesions In Genomes)即定向诱导基因组局部突变技术,是近年发展起来的一种高通量检测点突变的反向遗传学方法.本研究从PCR模板量及酶切体系中CEL I 的酶量两个方面对家蚕TILLING技术的检测体系进行了优化.结果表明:本实验在应用TILLING技术筛选家蚕突变体过程中,用于PCR扩增的家蚕基因组DNA模板最佳用量为20ng;CEL I 酶切的20μL反应体系中,加入的最适酶量为 0.5μL(本实验室从芹菜中自提的CEL I 酶10倍稀释液).本研究初步对TILLING技术应用于家蚕化学诱导突变检测体系进行了优化,为TILLING技术在家蚕功能基因组研究中的应用奠定了基础.