RNA干扰对人环氧化酶-2合成以及对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞生物学活性的影响

摘要

目的分析 siRNA 对前列腺素 E2（PGE2）、白介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF-α）和血管内皮生长因子（VEGF）合成的影响。方法设计4条（1#～4#）环氧化酶-2（hCOX-2）mRNA 的小分子干扰 RNA（siRNA）,设立空白阴性（CTL）和1条随机序列（NC）对照。应用LipofectAMINE 2000将 siRNA 转染入滑膜成纤维细胞（RASF）,4 h 后,再加入100 nmol/L 的佛波酯。应用 RT-PCR 和 Western 印迹分别检测 hCOX-2 mRNA 和蛋白表达水平。采用 ELISA 法检测各组上清液中致炎因子水平。结果转染48 h 后,NC、1#～4# siRNA 组与 CTL 组 mRNA 条带吸光度比值分别为0.72、0.3、0.25、0.4、0.04。转染36和48 h 后,各组与 CTL 组 hCOX-2蛋白吸光度比值分别为1.04、0.52、0.39、0.9、0和1.05、0.52、0.51、0.9、0.15;4#siRNA 组上清液 PGE2、IL-1β、TNF-α、IL-6和VEGF 水平较其他各组为低,且与其他处理组相比死亡细胞率差异无统计学意义（P 均＞0.05）。结论4#iRNA 组能有效抑制 COX-2mRNA 和蛋白表达,其上清液中致炎因子水平最低,死亡细胞较其他各组无明显增加。