分化抑制因子1在环氧合酶2介导的胃癌血管生成中的作用及机制研究

摘要

目的验证分化抑制因子1（Id-1）在环氧合酶2（COX-2）介导的胃癌血管生成中的作用及机制。方法建立高表达 COX-2和表达 COX-2特异性 siRNA 的胃癌 SGC7901细胞,通过Western 印迹和逆转录 PCR 方法检测两种亚细胞系中 Id1的表达,ELISA 方法分析两种细胞上清中血管内皮生长因子（VEGF）的表达差异。通过四唑盐比色（MTY）实验分析两种细胞亚系的上清对体外脐静脉内皮细胞（HU-LT）增殖的影响,并在 SGC7901/COX-2中抑制 Id1后观察培养上清中 VEGF 的变化以及对脐静脉内皮细胞（HU-LT）增殖的影响。裸鼠成瘤实验观察转染细胞的成瘤性及肿瘤新生微血管密度（MVD）。结果成功建立高表达 COX-2以及表达特异性 COX-2小干扰 RNA（siRNA）的稳定克隆,并鉴定了不同克隆的转染效率。高表达 COX-2的胃癌 SGC7901细胞中 Id1的蛋白及mRNA 表达水平增高,而转染 COX-2-siRNA 的 SGC7901细胞中 Id1的表达则均低于对照组。COX-2高表达的 SGC7901/COX-2细胞上清中 VEGF 的蛋白含量高于对照组（2060±42 vs 1248±28,P=0.000）,而 SGC7901/COX-2-siRNA 细胞上清中 VEGF 的蛋白含量低于对照组（1024±20,2033±27 vsP=0.000）。在 SGC7901/COX-2细胞条件培养基中,HU-LT 细胞生长较对照组快;在 SGC7901/COX-2-SiRNA 细胞条件培养基中,HU-LT 细胞生长较对照组缓。在 SGC7901/COX-2中抑制 Id1后,培养上清中 VEGF 的含量增加以及对 HU-LT 促进增殖的作用均被逆转。裸鼠成瘤试验显示抑制 Id1后SGC7901/COX-2细胞成瘤性降低[（353±12）mg vs（1020±91）mg,P=0.038],MVD 降低（8.8±1.6vs 20±1.7,P=0.001）。结论 COX-2可以上调 SGC7901细胞中 Id1的表达,并通过此途径影响内皮细胞的体外增殖能力。因此在胃癌发生发展中 Id1参与了 COX-2所介导的促血管生成过程,有可能成为胃癌抗血管治疗的新靶标。