Toll样受体4在人肺泡上皮细胞株中的表达及其在细胞炎症反应中的作用

摘要

目的明确人Ⅱ型肺泡上皮细胞是否表达 Toll 样受体4（TLR4）,探讨 TLR4在慢性阻塞性肺疾病（COPD）气道炎症中的作用。方法将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系 A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒 E1A 质粒（E1A+组）和转染不含有腺病毒 E1A 的空白质粒组（E1A-组）,分别以不同浓度的脂多糖（LPS,0、0.1、1、10μg/ml）、白细胞介素1β（IL-1β,0、0.1 ng/ml）、香烟提取物（CSE,0、10%、20%、40%）刺激。刺激后12、24h,用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞 IL-8 mRNA 和TLR4 mRNA 的表达,用蛋白质印迹技术测定核因子κB（NF-κB）亚单位 P65蛋白的表达。结果 10μg/ml LPS、0.1 ng/ml IL-1β或20%CSE 刺激24 h 后,E1A+组 IL-8 mRNA 表达量（2.82、1.87、4.70）明显高于正常对照组（0.95、0.78、1.02,均 P＜0.05）和 E1A-组（0.97、0.81、1.12,均 P＜0.05）。10μg/ml 的 LPS 刺激后12、24 h,E1A+组细胞 TLR4 mRNA 表达水平分别为4.52、7.99,明显高于正常对照组（1.91、3.81,均 P＜0.05）和 E1A-组（2.00、3.88,均 P＜0.05）;IL-1β也可增加 TLR4 mRNA 表达。CSE 刺激对各组细胞 TLR4 mRNA 表达水平均无明显影响。3种刺激因子均可引起各组细胞NF-KB 亚单位 P65蛋白表达水平增高。结论人Ⅱ型肺泡上皮细胞表达 TLR4,LPS、IL-1β引起 IL-8释放可能与 TLR4介导的 NF-KB 激活有关。