小干扰RNA干扰核因子κB信号通路对内毒素刺激巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α的影响

摘要

目的探讨小干扰RNA（siRNA）抑制核因子κB（NF-κB）信号通路对细菌脂多糖（LPS）刺激的巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。方法人单核细胞白血病THP-1细胞经氟波酯诱导为巨噬细胞后分2组,分别感染应用分子克隆技术构建的针对NF-κB P65的siRNA逆转录病毒质粒（siRNA病毒组）及乱序（Scramble）对照序列逆转录病毒质粒（Scramble病毒组）。用终浓度50μg/ml的LPS持续刺激2组巨噬细胞,分别应用RT-PCR技术检测LPS刺激不同时间巨噬细胞NF-κB P65 mRNA和TNF-αmRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB P65蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞培养上清液TNF-α含量。结果 LPS刺激12和24 h,siRNA病毒组巨噬细胞NF-κB P65 mRNA表达水平（0.97±0.02,0.89±0.01）明显低于Scramble病毒组（1.01±0.03,0.97±0.01,均P＜0.05）;LPS刺激24和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达水平（0.95±0.04,0.94±0.01）明显低于Scramble病毒组（1.07±0.06,1.03±0.05,均P＜0.05）。LPS刺激4、8、12和24 h的各时点,siRNA病毒组TNF-αmRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组（0.92±0.02比0.98±0.01,0.86±0.02比1.00±0.01,0.79±0.03比1.01±0.01,0.78±0.03比1.02±0.01,均P＜0.05）。LPS刺激2、4、8、24、36、48、54和72 h的各时点,siRNA病毒组巨噬细胞培养上清液TNF-α含量均明显低于Sramble病毒组（均P＜0.01）。结论针对NF-κB P65的siRNA可抑制NF-κB信号通路的功能活性,进而抑制内毒素刺激引起的巨噬细胞活化和TNF-α释放,提示RNA干扰技术在急性肺损伤早期过度炎症反应的防治中具有潜在应用价值。