人皮下、网膜脂肪组织来源前脂肪细胞的原代培养及甘精胰岛素对其增殖、分化的影响

摘要

目的探讨人皮下、网膜脂肪组织来源的前脂肪细胞形态、功能的差异,观察不同浓度甘精胰岛素对其增殖、分化的影响。方法胶原酶分离法原代培养人皮下、网膜前脂肪细胞,倒置显微镜下观察不同来源的人前脂肪细胞在形态方面的差异,不同浓度甘精胰岛素（20、200、500、1000、1500 nmol/L）干预其增殖及分化过程,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测二者增殖的差异,实时定量PCR检测脂肪分化相关基因表达的差异。结果（1）可从人皮下、网膜脂肪组织分离出前脂肪细胞,并在体外扩增,皮下前脂肪细胞更细长,容易增殖,而网膜前脂肪细胞呈多角形,易于老化。（2）MTT法结果显示甘精胰岛素抑制网膜前脂肪细胞的体外增殖,且其抑制作用具有剂量依赖性,1000 nmol/L干预72 h后,与未加胰岛素组相比,网膜前脂肪细胞的增殖明显低[吸光度（A）值:0.144±0.021比0.267±0.040,P＜0.01];皮下前脂肪细胞作用不明显（A值:0.305±0.045比0.350±0.037,P＞0.05）。（3）500 nmol/L的胰岛素浓度是人前脂肪细胞分化的适宜浓度,PCR结果显示该浓度时,对于皮下前脂肪细胞,脂肪分化的标志基因过氧化物酶增殖物激活受体（PPAR）γ（F=31.31,P＜0.01）和CCAAT/增强子结合蛋白α（C/EBPα）mRNA表达最高（F=9.86,P＜0.05）,前脂肪细胞的标志基因Pref-1表达最低（皮下F=68.95,P＜0.01;网膜F=30.38,P＜0.01）,但是胰岛素浓度对网膜脂肪细胞PPARγ、C/EBPαmRNA影响不大（均P＞0.05）。结论甘精胰岛素可抑制人网膜前脂肪细胞的增殖,促进皮下、网膜前脂肪细胞的分化。