miR-20b在肥胖小鼠脂肪组织中的表达及对前脂肪细胞增殖和分化的影响

摘要

目的 探究miR-20b在肥胖小鼠不同脂肪组织中的表达情况及对小鼠前体脂肪细胞(3T3-L1)增殖、分化的影响.方法 构建C57BL/6小鼠的肥胖模型,实时荧光定量PCR检测性腺脂肪(g-Fat)、腹股沟脂肪(i-Fat)及肾周脂肪(p-Fat)组织中miR-20b表达水平.培养并诱导3T3-L1细胞,脂质体法将miR-20b mim-ic(miR-20b mimic组)、miR-20b inhibitor(miR-20b inhibitor组)和阴性对照(NC组)转染至3T3-L1细胞,CCK-8法和EdU法检测miR-20b对3T3-L1细胞增殖的影响;油红O染色与三酰甘油测定评估miR-20b对3T3-L1细胞分化的影响;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-20b对3T3-L1细胞中增殖、分化标志物mRNA和蛋白表达的影响;双荧光素酶报告基因检测法验证miR-20b靶向调控3T3-L1细胞分化的基因.结果 与正常对照组小鼠比较,肥胖造模组小鼠g-Fat、i-Fat、p-Fat中miR-20b均显著高表达(P<0.05或P<0.01).与NC组比较,miR-20b mimic组3T3-L1细胞增殖受抑制,miR-20b inhibitor组3T3-L1细胞增殖明显提高(均P<0.05);与NC组比较,miR-20b mimic组积累了大量油红着色的脂滴,三酰甘油水平增加,而miR-20b inhibitor组效果相反;与NC组比较,miR-20b mimic组增殖标志物细胞周期蛋白质(Cyclin D1、Cyclin E)与细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2、CDK4)mRNA和蛋白的表达水平受抑制,分化标志物过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、CCAAT-增强子结合蛋白(C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)、脂蛋白酯酶(LPL)和超长链脂肪酸延伸酶(ELOVL6)mRNA和蛋白的表达水平明显升高,而miR-20b inhibitor组则表现出相反现象;过表达miR-20b可抑制野生型T细胞因子4(Tcf4)基因荧光素酶活性,而突变绑定位点可废除该抑制效应.结论 miR-20b不仅在脂肪组织中高表达,还可抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖,促进其诱导分化、沉积脂滴,并可能通过靶向调节Tcf4来介导3T3-L1分化.