UTMD联合抑制CREB基因促进动脉粥样硬化斑块稳定性的实验研究

摘要

目的探究超声靶向微泡破坏(UTMD)联合抑制环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)基因对动脉粥样硬化斑块稳定性的影响。方法将20只健康雄性新西兰兔(4~5月龄)随机分为空白组(n=5)、模型组(n=5)、对照组(单纯CREB质粒组,n=5)和治疗组(UTMD联合CREB质粒组,n=5),利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot实验分别评估CREB、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)的RNA和蛋白水平;实时剪切波弹性杨氏模量值和超声造影峰值强度评估斑块;乳胶增强免疫比浊测定血清白介素(IL)-17A和超敏C反应蛋白(hs-CRP)含量;利用免疫组化染色评估斑块内VEGF、MMP-2/9的表达及定位。结果治疗组CREB、VEGF和MMP-2/9的mRNA水平和表达低于模型组和对照组(t≥4.59,均P<0.05)。与空白组相比模型组存在hs-CRP和IL-17A的高表达(t≥13.51,均P<0.05);对照组和治疗组hs-CRP和IL-17A的表达较模型组低,并且治疗组hs-CRP和IL-17A的表达低于对照组(t≥2.50,均P<0.05)。实时剪切波弹性成像及超声造影提示,与模型组和对照组相比,治疗组斑块杨氏模量值显著性升高,造影峰值强度值明显下降(t≥4.60,均P<0.05)。免疫组化显示,治疗组VEGF和MMP-2/9的表达阳性细胞数明显低于模型组和对照组。结论通过建立动脉粥样硬化动物模型和评估斑块的蛋白表达发现,UTMD联合CREB质粒具有比单纯CREB质粒更高的转染效率,有效降低斑块的CREB蛋白表达,使斑块更加稳定。