鸡传染性法氏囊病病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要

为建立一种鸡传染性法氏囊病RT-PCR检测方法,根据GenBank中已发表的鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)的基因组序列(登录号:X92760).设计合成1对引物,通过优化PCR反应的条件,建立针对IBDV的RT-PCR检测方法.结果显示:RT-PCR扩增产物在610 bp条带处可见到与预期大小相符的特异性条带;将扩增产物纯化回收后连接到pMD18-T克隆载体上,利用EcoR Ⅰ/HindⅢ双切酶鉴定后可在610 bp处见到特异性条带,测序结果与IBDV序列一致;利用设计的引物同时对IBDV、ILTV、NDV、MDV、AIV进行RT-PCR检测,只有IBDV的扩增结果为阳性,其余均为阴性;建立的RT-PCR检测方法的灵敏度为(10 pg)0.1μL;用该检测方法对同种病料重复检测,结果完全一致;应用建立的方法对临床病例进行检测,16份样品中有6份检测为阳性.以上结果表明,建立的RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可用于鸡传染性法氏囊病的诊断和流行病学的研究.