AlphaLISA检测金黄色葡萄球菌肠毒素D

摘要

目的 利用新型均相化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)检测金黄色葡萄球菌肠毒素D(SED),并与传统酶联免疫吸附测定(ELISA)进行比较.方法 采用SED单抗偶联发光微球,生物素标记另一SED单抗,以及链霉亲和素偶联感光微球构建SED AlphaLISA检测体系;SED单抗包被,另一生物素标记SED单抗检测,链霉亲和素偶联辣根过氧化物酶(HRP)放大,构建SED ELISA检测体系.结果 与结论 确定AlphaLISA发光微球和生物素标记抗体的最适稀释比例为1:50和1:1000;确定ELISA包被抗体的最适浓度为3μg/ml,生物素标记抗体和链霉亲和素偶联HRP的最适比例分别为1:1000和1:2000;AlphaLISA对缓冲液和牛奶模拟样本SED的检出限为100 pg/ml,变异系数(CV)为0.3％～8.9％;ELISA对缓冲液和牛奶模拟样本SED的检出限为781.29 pg/ml,CV为1.0％～19.8％;两种方法 均不与其他型肠毒素抗原产生交叉反应.与ELISA相比,AlphaLISA检测SED灵敏度、精确性更高.