鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统效应子YopT基因克隆及功能的初步研究

摘要

目的构建鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）Ⅲ型分泌系统效应子YopT真核表达载体,并初步探讨其对宿主天然免疫的影响。方法提取Y.pestis 91001株基因组DNA,并以此为模板,PCR扩增yopT基因,酶切并连接入pCMV-HA载体,转化后挑选阳性克隆送测序。测序正确的克隆进行质粒扩增后,转染HEK293T细胞,免疫印迹检测其表达。通过荧光素酶报告基因分析的方法检测YopT对IFN-β及NF-κB基因的影响。结果成功克隆了yopT基因,并在真核细胞中得到表达;yopT抑制IFN-β及NF-κB报道基因活性。结论初步研究表明,yopT抑制IFN-β和NF-κB基因表达,为进一步研究yopT的功能打下了基础。