A型肉毒毒素轻链多步纯化及其金属蛋白酶活性研究

摘要

目的利用基因工程方法原核表达N-His标签的A型肉毒毒素轻链（Bo NT-ALC）蛋白,多步纯化获得高纯度蛋白,并对其金属蛋白酶活性进行鉴定。方法以A型肉毒毒素为模板,构建重组表达载体p ET22b-ALC,转化BL21（DE3）,诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯化、阴离子交换以及分子筛纯化获取高纯度目的蛋白;通过体外切割特异性底物SNAP-25实验进行酶活性研究。结果与结论获得高纯度的Bo NT-ALC蛋白,对金属蛋白酶活性进行了验证。该纯化方法获得的蛋白纯度高、均一性好,且具有很好的酶活性,为后续研究奠定了基础。