TDCPP暴露对PC12细胞CaMK2及MAPK信号通路的影响

摘要

目的研究磷酸三（1,3-二氯-2-丙基）酯（TDCPP）暴露对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）[Ca2＋]i稳态的影响及其潜在毒性作用机制。方法建立PC12神经细胞体外培养模型,选用50μmol/L TDCPP分别暴露PC12细胞0~4 d以及分别以0、5、15、25、50μmol/L TDCPP暴露PC12细胞4 d,采用Fluo-3AM荧光探针法检测[Ca2＋]i水平;采用Western印迹法检测钙依赖/钙调蛋白激酶2（CaMK2）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白及其磷酸化水平的变化。结果 PC12细胞内[Ca2＋]i稳态遭到破坏,随暴露时间的延长,胞内[Ca2＋]i水平呈增多的趋势（P〈0.01）,且随暴露剂量的增加,胞内[Ca2＋]i水平增多,呈明显剂量效应关系（P〈0.05）。CaMK2和MAPK通路蛋白磷酸化水平增加,且CaMK2蛋白的磷酸化呈现明显的时间和剂量效应（P〈0.01）;c-Jun氨基端激酶（JNK）和p38蛋白的磷酸化水平变化趋势相似,呈现一定的时间和剂量效应,但细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）蛋白的磷酸化水平随暴露时间的延长无改变。结论 TDCPP的暴露可引起PC12细胞内[Ca2＋]i超载,破坏其稳态;激活CaMK2,使其磷酸化增多;同时激活MAPK通路,从而造成PC12细胞生存率的降低,细胞凋亡率的增加。