叶酸对铅暴露下PC12细胞增殖、凋亡及抗氧化能力的影响

摘要

目的:近些年由于环境污染问题屡见不鲜，导致各种食源性铅污染层出不穷，对人们健康生活造成了严重影响。通过食物链并利用食物的天然成分来提高机体的抗氧化能力和应对氧化应激水平的能力，已成为目前功能性食品研究的新方向。叶酸是一种在蔬菜水果中含量丰富的维生素，它具有较强的抗氧化能力，对神经干细胞有促进作用。所以我们构建PC12细胞模型，以铅作为细胞损伤的诱导剂，叶酸作为细胞保护剂进行实验。研究铅对神经细胞的损伤机理，以及叶酸对铅暴露下受损的神经细胞增殖凋亡及抗氧化能力及培养液中Aβ40和Aβ42的影响。
　　方法:在细胞稳定生长的条件下，用不含铅的完全培养液及10μmol/L的醋酸铅培养液对PC12细胞进行染毒24h，随后将培养液全部吸出，并分别用浓度为0mg/L，0.5mg/L，5mg/L，50mg/L的叶酸培养液继续作用，并分别在24h，48h及72h后收集干预过的PC12细胞，使用MTT对细胞的增殖或抑制情况进行检测。并提取细胞蛋白，检测各组细胞SOD、GSH-PX的活力及MDA的含量，使用免疫荧光法对凋亡蛋白Caspase-3蛋白表达水平的变化进行分析。使用ELISA检测细胞培养液中Aβ40及Aβ42的变化。
　　结果:根据MTT结果显示，铅暴露可以抑制PC12细胞的生长，并且随着时间的增加，抑制率越来越高（P＜0.05）。叶酸则对PC12细胞的增殖有显著促进作用（P＜0.05），随着时间的增加（72h内）细胞的增殖率是下降的，但细胞总数是增加的，且在一定剂量范围内，叶酸浓度越大，PC12细胞的增殖率及细胞数量均呈现上升趋势。叶酸对铅暴露组PC12细胞具有显著促进作用(P＜0.05)，且随着叶酸剂量的增加，叶酸干预铅暴露组的细胞抑制率是逐渐降低，细胞数量不断升高。根据各氧化指标结果显示，铅能显著增加胞内MDA含量及SOD的活力，并显著降低GSH-PX的活力(P＜0.05)，50mL/L的叶酸显著提高胞内MDA含量及GSH-PX的活力(P＜0.05)，与铅暴露组相比，50mL/L的叶酸能显著降低铅暴露组MDA的含量，显著提高SOD及GSH-PX的活力(P＜0.05)。免疫荧光结果显示，铅暴露组Caspase-3蛋白显著增加;与对照组相比，叶酸组Caspase-3的表达也是显著增加;与铅暴露组相比，叶酸能显著降低铅暴露组胞内Caspase-3的表达。ELSA结果显示，与对照组相比，铅暴露组细胞培养液中Aβ40显著降低(P＜0.05)，叶酸50mg/L组细胞培养液中Aβ40是增加的，但不存在显著性差异(P＞0.05);叶酸50mg/L干预铅暴露组细胞培养液Aβ40的含量与对照组、叶酸50mg/L组、铅暴露组均不存在显著性差异(P＞0.05)。但是各组细胞培养液中Aβ42均不存在显著性差异(P＞0.05)。
　　结论:铅可提高胞内脂质过氧化程度、氧化应激水平，诱导Caspase-3蛋白的表达来抑制细胞生长并促进细胞凋亡，叶酸能保护铅暴露后受损的PC12细胞其可能通过上调胞内SOD，GSH-PX的活力，下调MDA的含量，进而抑制或延缓Caspase-3蛋白的表达来保护受损的细胞。而高剂量的叶酸长时间作用细胞是否会产生副作用，还需要进一步的研究证实。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 文献综述

1．1．2 食品中的铝污染的来源

1．1．3 食品中铅污染的现状

1．1．4 铅污染对人体的危害

1．1．5 铝中毒机制研究

1．1．6 铅与阿兹海默病

1．2 叶酸对神经细胞的保护作用

1．2．1 食品中的叶酸

1．2．2 人体缺乏叶酸的危害

1．2．3 叶酸的抗氧化性

1．2．4 叶酸的毒性

1．3 本研究的意义及目的

1．4 研究内容

第二章 PC12细胞铅暴露模型的建立及叶酸对其生长发育的影响

2．1 试剂与仪器

2．1．2 主要仪器及耗材

2．1．3 相关溶液及其配制方法

2．2．1 细胞培养方法

2．2．2 构建PC12细胞铝暴露模型

2．3．2 PC12细胞实验分组

2．3．3 计算细胞增殖抑制率

2．4 数据处理

2．5 结果与分析

2．6 讨论

第三章 叶酸对铅暴露下PC12细胞抗氧化能力的影响

3．1 试剂及仪器

3．1．1 主要试剂

3．1．2 主要仪器

3．2 实验方法

3．2．1 细胞实验分组

3．2．2 提取PC12细胞总蛋白

3．2．3 SOD活力测定

3．2．4 MDA含量测定

3．2．5 GSH-PX活力测定

3．3 数据处理

3．4 结果与分析

3．5 讨论

3．5．1 自由基与氧化应激

3．5．2 叶酸对铅暴露下PC12细胞抗氧化能力的影响

第四章 叶酸对铅暴露下PC12细胞内Caspase-3蛋白表达的影响

4．1 试剂与仪器

4．1．1 主要试剂

4．2．1 细胞准备

4．2．2 免疫荧光步骤

4．3 数据处理

4．4 结果与分析

4．5 讨论

4．5．1 细胞坏死与细胞凋亡

4．5．2 叶酸与细胞凋亡

4．5．3 叶酸对铅暴露下PC12细胞内Caspase-3蛋白表达的影响

第五章 叶酸对铅暴露下PCI2细胞培养液中Aβ40和Aβ42的影响

5．1 材料与方法

5．1．1 主要试剂

5．1．2 主要仪器

5．2 实验方法

5．2．2 检测细胞培养液Aβ-42含量

5．2．3 分别绘制Aβ-40和Aβ-42的标准曲线

5．3 数据分析

5．4 结果与分析

5．5 讨论

第六章 结论与创新点

6．1 全文总结

6．2 创新点

参考文献