牙髓干细胞来源外泌体对急性肺损伤的作用及机制研究

摘要

目的观察牙髓干细胞（DPSC）来源的外泌体对脂多糖（LPS）诱导大鼠肺泡巨噬细胞急性肺损伤（ALI）模型的作用及机制。方法 DPSC培养至第6代后,换无血清培养基处理24 h,收集上清液,采用超速离心法分离外泌体。取对数生长期的大鼠肺泡巨噬细胞（PAM）NR8383接种于12孔板,分别用1μg/ml LPS或联合外泌体处理细胞。在细胞处理前（0 h）和处理后6、12、24 h收集细胞上清液,通过酶联免疫吸附实验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和IL-6。裂解提取细胞蛋白,采用Western印迹法测定细胞外调节蛋白激酶（p44/42）、转录因子NF-κB（p65）、IκBα蛋白的表达量及其磷酸化水平。结果与对照组比较,LPS处理组TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著增高（P〈0.05）,提示LPS诱导ALI细胞造模成功。与LPS处理组相比,高剂量外泌体处理后,TNF-α和IL-1β表达量明显降低（P〈0.05）;IL-6在低剂量和高剂量的外泌体处理后均有明显降低（P〈0.05）。DPSC来源的外泌体能降低转录因子NF-κB（p65）、IκBα以及p44/42的磷酸化水平。结论 DPSC来源的外泌体对LPS诱导的ALI有保护作用,其机制可能与抑制MAPK和NF-κB信号通路的激活有关。