扶正抗癌方通过M2型巨噬细胞来源的外泌体途径抑制95D细胞转移的作用机制研究

摘要

目的 观察经扶正抗癌方预处理的M2型巨噬细胞来源的外泌体对95D细胞侵袭和迁移的影响,探讨其经外泌体途径抑制95D细胞转移的分子机制.方法 利用佛波酯诱导人外周血单核细胞THP-1为巨噬细胞(MΦ组),利用重组人白细胞介素(IL)-4、重组人IL-13诱导THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞(MΦ+IL-4+IL-13组),Western blot检测巨噬细胞标志物CD206、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和转化生长因子-β(TGF-β)表达;差速离心法提取外泌体,透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体标志物溶酶体相关膜蛋白-3(CD63)和肿瘤易感基因101(TSG101)蛋白表达;设置M2型巨噬细胞外泌体组(M2-exo组)和经扶正抗癌方(1.5 mg/mL)预处理24 h的M2型巨噬细胞外泌体组(FZKA-M2-exo组),Transwell实验和划痕实验分别检测95D细胞侵袭和迁移能力,RT-qPCR和Western blot分别检测E盒结合锌指蛋白(ZEB1)、E-钙黏素(E-cadherin)、N-钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA和蛋白表达.结果 与MΦ组比较,MΦ+IL-4+IL-13组CD206和TGF-β表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),iNOS表达显著降低(P<0.01).提取外泌体后,透射电镜观察可见膜性微囊泡结构物,且外泌体标志物CD63和TSG101蛋白表达均升高.与M2-exo组比较,FZKA-M2-exo组穿过Transwell小室细胞数量显著减少,光密度显著降低(P<0.01),划痕24 h后,划痕宽度明显增加(P<0.01),ZEB1、N-cadherin和Vimentin mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),E-cadherin mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01).结论 扶正抗癌方可通过M2型巨噬细胞来源的外泌体途径抑制细胞上皮-间质转化进程,进而抑制95D细胞转移.