我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA体外RNA转录物感染性的研究

摘要

目的：研究我国登革２型病毒４３株（Ｄ２－４３）基因组全长ｃＤＮＡ体外ＲＮＡ转录物的感染性，为进一步阐明登革２型病毒的致病机制及探索其新型疫苗奠定基础。方法：用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶系统制备Ｄ２－４３基因组全长ｃＤＮＡ的体外ＲＮＡ转录物，纯化后经电穿孔法转染Ｃ６／３６细胞，观察致细胞病变作用以判断其感染性。从病变的细胞和培养上清中提取总ＲＮＡ，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增及克隆测序的方法证实细胞病变确为ＲＮＡ转录物感染所致；同时收集可产生细胞病变的培养上清，再感染Ｃ６／３６细胞以进一步证实该体外ＲＮＡ转录物感染的稳定性。结果：以我国Ｄ２－４３病毒株基因组全长ｃＤＮＡ为模板制备的体外ＲＮＡ转录物可使Ｃ６／３６细胞产生病变，从病变细胞和培养上清中可扩增获得病毒特异的基因片段。在培养细胞中进行连续传代仍可产生细胞病变作用。结论：构