Sanger测序法确证硫代修饰反义脱氧寡核苷酸的序列

摘要

目的:建立一种简便、可靠的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸序列确证方法,为反义药物的质量控制及新药研究与开发奠定基础.方法:选择含有待测反义脱氧寡核苷酸序列在内的一段靶基因为模板,以待测序的硫代修饰反义脱氧寡核苷酸作为下游引物,同时在其上游设计一条引物,进行PCR扩增,使待测序的反义序列以修饰形式掺入到PCR扩增产物中;以上述掺入反义序列的PCR扩增产物为模板,利用Sanger双脱氧链终止测序法对其进行自动序列分析.结果:该方法可对不同长度硫代修饰的反义序列进行测定,并且可有效地检测出合成过程中产生的突变和缺失序列,与质谱法相比,仪器和试剂更普及,方法易于掌握且测序成本低,用样量少.结论:该方法可用于硫代修饰反义脱氧寡核苷酸药物的序列确证.