激活方法对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响

摘要

目的:探讨电激活及化学激活对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响.方法:采用血清饥饿法同步化处理的SD大鼠成纤维细胞作为供体细胞,常规超排KM小鼠获得卵母细胞,采用盲吸法去核,显微直接注核法构建重组胚,分别采用6-DMAP+乙醇、放线菌酮、透明质酸酶3种化学激活方法和不同电场强度、脉冲电激活重组胚,CZB培养液中培养,观察重组胚发育.结果:电激活:电场强度(V/cm)/脉冲时间(ms)为:1 000/100,1 500/30,1 800/30,2 400/40时,卵裂率分别为:17.39%,28.07%,26.52%,0.00%.化学激活:使用透明质酸酶、放线菌酮、6-DMAP+乙醇时卵裂率分别为:5.56%,25.00%和33.91%.结论:电激活和化学激活均可有效激活重组胚;电激活时当电压为1 500～1 800 V/cm、脉冲为30～40 ms时,有利于重组胚的发育,电压过高时会将重组胚击碎;本实验所有激活方法中,6-DMAP+乙醇激活法所得卵裂率和桑椹胚率最高.