猪链球菌2型溶血素基因的表达及其免疫原性

摘要

[背景]猪链球菌(Streptococcus suis,ss)是一种重要的人兽共患病原菌,有35种血清型,其中以猪链球菌2型(SS2)危害最为严重.研究发现,各种血清型SS分泌的溶血素(Suilysin,SLY)可能具有较好的免疫保护作用,因此,SLY作为SS基因工程亚单位疫苗的成分具有较大优势.[目的]获得SS2安徽强毒株(AH10-8株)溶血素基因(sly)的表达产物,并对其免疫原性进行测定分析.[方法]根据GenBank数据库中登录号为DQ443533.1的全长sly序列,设计合成一对分别带有BamH Ⅰ、Xho Ⅰ酶切位点的特异性引物,利用PCR从AH10-8株中扩增sly基因,构建pET-30a-sly原核表达重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达和His-Tag镍柱纯化蛋白,SDS-PAGE检测SLY,Western blotting鉴定SLY的反应原性;利用昆明鼠和斑马鱼进行SLY免疫攻毒保护试验,间接ELISA方法检测昆明鼠血清IgG抗体效价,观察比较病理组织变化及其免疫保护率.[结果]重组质粒pET-30a-sly在大肠杆菌中实现高效表达,获得大小为60 kD的目的蛋白,与预期大小的SLY分子质量一致,能与SS2阳性血清发生特异性反应.SLY和AH10-8株灭活全菌体3次免疫昆明鼠后的血清IgG抗体效价分别为1∶6 400、1∶204 800(以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原)和1∶102 400、1∶51 200(以SLY为包被抗原);SLY和AH10-8株灭活全菌体对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为40％、80％和84％、92％;病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显.[结论]成功表达的SLY具有良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫反应,有望成为研制SS2新型疫苗的候选成分.