细菌耐热植酸酶基因的克隆及表达

摘要

设计筛选培养基,从203株细菌菌株中筛选到四株可以分解植酸的菌株:SD01N,SD01X,SD01B和SD01D,设计植酸酶基因特异性引物P1和P2,分别以这四株菌的基因组DNA为模板进行扩增,其中菌株SD01N出现一条明显的扩增条带,大小约1.2kb.对PCR产物进行序列分析表明,该片段含有一个编码383个氨基酸的开放阅读框架.将该片段与载体pQE-30连接后转化大肠杆菌M15,得到重组菌株SDLiuTP01,对该菌株进行培养,经IPTG诱导基因表达,与携带空载体菌株相比较,在菌株SDLiuTP01中可检测到植酸酶活力.对重组菌株的植酸酶活力考察表明,该酶在25℃～95℃温度范围均具生物活性,最适反应温度为75℃,属于耐热性植酸酶.在各pH缓冲系统中反应结果,酶活力出现两个较高值,分别为pH4.6和pH7.5.