用GAP启动子在Pichia pastoris GS115中组成型表达鼠灰链霉菌腺苷酸脱氨酶

摘要

[目的]构建产AMP脱氨酶的重组毕赤酵母(Pichia pastoris GS 115)菌株,并初步优化其发酵条件.[方法]以鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)基因组为模板PCR扩增获得腺苷酸脱氨酶基因AMPD,以pGAP9K为载体构建重组表达质粒pGAP9K-AMPD并通过电转化法转入Pichia pastoris GS 115,筛选转化子对其酶活进行测定,并初步优化其发酵条件.[结果]构建了毕赤酵母重组菌,通过分光光度法测定,显示重组菌有明显的酶活;初步优化发酵条件为:该重组菌最适发酵培养基为:甘油2％,蛋白胨2％,酵母膏1％,KH2PO4 0.5％,MgSO4·7H2O0.05％,pH 6.0;发酵条件为:接种龄24 h,转接量3％,30℃、200 r/min培养96 h,取发酵上清液测定酶活,重组菌腺苷酸脱氨酶酶活达到2 230±60 U/mL.[结论]构建了一株产AMP脱氨酶活性较高的重组毕赤酵母菌株,并通过优化发酵条件使其酶活达到2 230土60 U/mL.为AMP脱氨酶工业化生产奠定了一定的基础.