三种核酸提取方法在2019新型冠状病毒检测中的比较

摘要

目的:比较三种核酸提取方法在2019新型冠状病毒检测中的效果,为优化2019新型冠状病毒检测效果提供依据.方法:选用2020年2～3月新冠肺炎确诊患者的咽拭子共50份,作为研究对象.并选阳性标本一例,进行1∶ 2、1∶ 4、1∶ 8、1∶ 16、1∶ 32、1∶ 64、1∶ 128、1∶ 256比例稀释,获得不同浓度的新冠病毒标本.分别以柱提法、磁珠法和浓缩法三种方法提取病毒核酸(包括ORF1ab基因和N基因),并进行荧光RT-PCR扩增,根据扩增结果对三种方法的核酸提取情况进行比较.结果:用三种核酸提取方法对新冠病毒核酸ORF1ab基因的提取检出率和对实验室确认阳性检出率有统计学差异,磁珠法最佳(P＜0.05),对新冠病毒核酸N基因的提取检出率无统计学差异(P＞0.05).在稀释倍数为1:64的阳性标本,三种提取方法提取到的ORF1ab基因Ct结果有统计学差异(P＜0.05),而提取到的N基因Ct结果无统计学差异(P＞0.05);当稀释倍数为1:128时,浓缩法提取不到ORF1ab基因和N基因,而柱提法和磁珠法比较均有统计学差异(P＜0.05);当稀释倍数为1:256时,磁珠法仍可以提取到N基因.结论:磁珠法是快捷有效的核酸提取方法,即使在高倍稀释的情况下也能够达到较高的核酸提取率,并能实现自动化,避免了手工提取的误差,能为临床诊治提供一个快速准确的检测手段,能适应新冠肺炎疫情大规模的筛查需求.