小鼠β防御素3在大肠杆菌中的融合表达及其抗菌作用的初步研究

摘要

目的 构建小鼠β防御素3(mouse β defensin 3,mBD3)基因的原核表达载体pET-32a(+)/mBD3,诱导mBD3融合蛋白在大肠杆菌中的表达,并融合蛋白的抗菌活性.方法 运用PCR技术从质粒pcDNA3.1(+)/mBD3中扩增mBD3基因片段,将该片段插入pET-32a(+)原核表达载体,并对构建的重组质粒进行PCR、酶切和洲序鉴定.将鉴定正确的质粒转化大肠杆菌表达菌株Rosetta-gami(2),用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达.采用SDS-PAGE和Western Blot鉴定融合蛋白.通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白,用徽量液体稀释法测定融合蛋白鼠β防御素3(fmBD3)的抗菌活性.结果 mBD3的原棱表达载体pET-32a(+)/mBD3构建成功,在大肠杆菌中表达出fmBD3并提取获得纯化的融合蛋白.fmBD3对单细胞真菌具有较好的抑制和杀灭作用,可抑制革兰阳性菌的生长,而对革兰阴性菌无作用.结论 构建的原核表达载体在大肠杆菌中成功表达fmBD3,该融合蛋白显示出较强的杀真菌作用和一定的抗细菌作用,为进一步研究鼠防御素的抗徽生物活性奠定了实验基础.