真核表达载体pIRES2-EGFP-p93的构建及在卵巢癌细胞HO-8910中的表达

摘要

目的:构建肿瘤抑制基因DOC-2的真核表达载体pIRES2-EGFP-p93,将其转入人源性卵巢癌细胞株HO-8910中,并得到稳定表达.方法:利用XhoI酶切含有p93cDNA 的质粒得到p93cDNA基因片段,将其正向连接入真核表达载体pIRES2-EGFP,并通过酶切鉴定.用脂质体介导的方法,将真核表达载体pIRES2- EGFP-p93 转染人卵巢癌细胞系HO-8910,通过G418筛选稳定表达克隆;分别在荧光显微镜下及用免疫组化法观察人DOC-2蛋白在卵巢癌细胞系HO-8910中的表达.结果:构建了DOC-2的真核表达载体pIRES2-EGFP-p93,并通过酶切鉴定.在荧光显微镜下,转染了pIRES2-EGFP-p93的人卵巢癌细胞HO-8910发出绿色荧光,荧光全部集中于胞浆内.免疫细胞化学染色结果显示转染了pIRES2-EGFP-p93的人卵巢癌细胞HO-8910胞浆呈棕黄色,而转染空载体的细胞呈阴性染色.结论:成功构建了真核表达载体转染了pIRES2-EGFP-p93,并在人卵巢癌细胞系HO-8910中稳定表达,为研究DOC-2蛋白对卵巢癌细胞的作用奠定了基础.