抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系HO-8910中的表达

摘要

目的：构建多肿瘤抑制基因１（ＭＴＳ１）的真核表达载体，将其转入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中，并得到稳定表达，为进一步研究其对卵巢癌细胞的影响奠定实验基础．方法：利用ＢａｍＨⅠ与ＥｃｏＲⅠ从ｐＵＣ１９－ｐ１６质粒上切下ＭＴＳ１ｃＤＮＡ片段并克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上，构建成ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６；利用脂质体（Ｆｕ－ＧＥＮＥＴＭ６）介导的基因导入法将ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６导入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中；采用ＡＢＣ法对转染后的不同代数细胞进行免疫细胞化学检测，观察ｐ１６蛋白的表达．结果：成功构建了ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６，并进行酶切鉴定；转染后经Ｇ４１８筛选２ｗｋ出现阳性克隆８９１０－ｐ１６，并检测到其中有ｐ１６蛋白的稳定表达．结论：成功构建ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６，并可在人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中得到稳定表达．