双基因重组腺病毒表达载体pAdxsi-GFP-HIF-KGF的构建及表达

摘要

目的:构建同时携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和角质细胞生长因子(KGF)的腺病毒载体(pAdxsi-GFP-HIF-KGF),观察其在A549中的表达.方法:从低氧处理A549细胞中PCR扩增HIF-1 αcDNA,并连接到载体pShuttle-CMV-EGFP上得到重组质粒pShuttle-GFP-HIF,同时将从质粒pIRES2-EGFP-KGF扩增的KGF基因也克隆其上,获得穿梭重组质粒pShuttle-GFP-HIF-KGF.再将其重组到pAdxsi病毒骨架载体上,构建携带HIF-1α和KGF双基因的重组腺病毒载体.观察重组腺病毒转染A549细胞后表达情况.结果:证实携带HIF-1α和KGF双基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF-KGF成功构建.其转染A549细胞后可有效表达HIF-1和KGF蛋白,48 h时HIF-1蛋白表达水平为(56.36±4.53)ng/ml,KGF蛋白表达水平为(60.20±2.92)ng/ml.结论:成功构建了双基因腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF-KGF,其可有效转染表达,具有进一步在肺损伤防治应用的前景.