利用微生物代谢酶转化白藜芦醇及大豆异黄酮的方法研究

摘要

目的 建立一种将白藜芦醇苷和大豆异黄酮糖苷(染料木苷)转化为白藜芦醇和大豆异黄酮(染料木黄酮)的最佳且简易方法.方法 用固体培养基发酵黑曲霉Aspergillus niger S,通过硫酸铵沉淀、阴离子交换与分子筛分离纯化得到葡萄糖苷酶,使用该酶可将白藜芦醇苷和大豆异黄酮糖苷酶解转化为白藜芦醇和大豆异黄酮.改进后的HPLC色谱条件为C18柱,乙腈/水梯度洗脱,紫外检测器检测波长280nm.结果 纯化后葡萄糖苷酶分子量为165kD,此蛋白分子量大小与很多其他已报道的葡萄糖苷酶不同.用改进后的HPLC方法进行转化监测,转化过程选用的最适反应温度为50℃,最适pH为pH5～10.温度<40℃或>60℃,或pH<4时酶活性会有一定程度的减低或丧失.转化前色谱图上白藜芦醇苷保留时间27min,大豆异黄酮糖苷保留时间39min.酶解转化后所得产物白藜芦醇保留时间45min,大豆异黄酮保留时问64min.结论 本实验从黑曲霉中分离纯化所得葡萄糖苷酶,可同时高效水解白藜芦醇苷和大豆异黄酮糖苷为相应苷元.经改进后的HPLC方法可快捷便利并准确有效的检测白藜芦醇和大豆异黄酮及其苷元,对今后的工业生产或临床研究具有重要意义.