死亡相关蛋白(DAP-5)在庆大霉素诱导的人肾小管上皮细胞凋亡过程中的表达变化及机制

摘要

目的 建立庆大霉素诱导人肾小管上皮细胞(HK2)凋亡模型;观察死亡相关蛋白5(DAP5)在HK2凋亡过程中的表达变化,并探讨其与PI3K/Akt/mTOR通路之间的关系.方法 以3.2mg/ml庆大霉素作用于HK2,应用琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA条带,流式细胞仪测定细胞凋亡率.采用Western blotting法观察DAP5与Akt、P-Akt表达的改变,应用雷帕霉素阻断PI3K/Akt/mTOR通路后观察DAP5的表达变化.结果 庆大霉素作用24h后HK2细胞即出现凋亡,凋亡率随时间延长而增加,24、36, 72h的凋亡率分别为5.9％,23.0％,49.9％(P＜0.05).与此同时,细胞DAP5活化裂解生成DAP5/p86,且表达逐渐增加(P＜0.05).在凋亡的同时p-Akt蛋白的表达水平也逐渐增加(P＜0.05),应用雷帕霉素阻断PI3K/Akt/mTOR通路后,裂解产生的DAP5/p86减少(P＜0.05).结论 庆大霉素可诱导HK2细胞发生细胞凋亡,凋亡率随时间的延长而增加.在诱导HK2细胞凋亡过程中DAP5裂解活化产生DAP5/p86,且这一过程可能是经过PI3K/Akt/mTOR途径来完成的.