双报告基因标记乳腺癌细胞移植瘤模型的建立及活体成像研究

摘要

目的：探索双报告基因标记技术用于建立乳腺癌小鼠移植瘤模型并进行活体成像研究的可行性。方法利用慢病毒转染技术将绿色荧光蛋白(eGFP)和荧光素酶(Fluc)融合基因标记人乳腺癌MDA-MB-231细胞，利用流式细胞术筛选建立稳定细胞系，利用荧光显微镜和流式细胞术检测转染率，体外细胞成像检测Fluc的表达；将转染后的231细胞接种至NOD/SCID小鼠皮下建立移植瘤模型，活体成像监测移植瘤Fluc的发光。结果荧光显微镜下观察建立的稳定细胞系中GFP表达率高，流式测定表达率95.2%，传代扩增5次后表达率无明显变化。体外细胞成像检测到明显的Fluc发光，信号强度与细胞数成正比。所有实验小鼠均接种成功，可观察到Fluc信号强度随时间逐渐增强。结论慢病毒介导的Fluc-eGFP双报告基因标记可用于体内移植瘤活体成像，为乳腺癌相关机制及治疗研究提供了直观，准确的平台。