改良树突状细胞的体外诱导和成熟调控方法

摘要

目的：改良树突状细胞培养方法，以期获得完全成熟、表型稳定的树突状细胞，且能避免反复取血的问题。方法：采用全自动血细胞分离仪分离健康志愿者外周血单个核细胞；贴壁法分离外周血单核细胞，分次加入IL-4与GM—CSF共同诱导培养6天，再给予单核细胞调控培养基诱导成熟2～3天，在倒置相差显微镜观察树突状细胞形态；流氏细胞术检测未成熟和成熟树突状细胞表型；MTT法检测单核细胞、未成熟树突状细胞和成熟树突状细胞刺激自体T淋巴细胞增殖的能力；ELISA法测定成熟和未成熟树突状细胞合成分泌细胞因子IL-12水平。结果：100ml人外血能够诱导出CD83＋的树突状细胞1．25×107±0．3×107个；体外诱导的树突状细胞高表达CD86、CD83、CD40、CD1a和HLA—DR分子，具有典型成熟树突状细胞形态，较强的IL-12分泌能力和刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。结论：改良树突状细胞培养方法能够诱导出完全成熟的树突状细胞。