n-6脂肪酸去饱和酶fat-1基因对神经元细胞凋亡的抑制作用

摘要

将C.elegans n-6脂肪酸去饱和酶基因fat-1的cDNA插入到腺病毒的穿梭载体pad-CMV中,并与骨架栽体同源重组,构建腺病毒重组栽体(Ad.GFP.fatl),通过包装细胞系(293)产生重组腺病毒,感染原代培养的大员皮层细胞.在显微镜下观察、细胞增殖试剂盒(MTT)和凋亡染色试剂盒分析FAT-1基因对大鼠皮层细胞凋亡的影响,核糖核酸酶保护性分析,检测FAT-1基因在大鼠皮层细胞內的表达,酶联免疫分析花生四烯酸类(Eicosanoids)前列腺素(Prostaglandin E2的含量.结果表明,通过基因重组技术,得到预期的重組病毒;fat-1基因在原代培养的大鼠皮层细胞中能有效异源表达,2 d后.可检测到Fat-1 mRNA的条带.与对照Ad.GFP细胞相比,Fat-1基因明显抑制了大鼠皮层细胞因诱导产生的凋亡(35%),受保护细胞的前列腺素含量也明显地减少(30%).