ACE2-mCherry融合基因表达载体的构建及功能验证

摘要

目的:构建带有荧光标记的血管紧张素转化酶2(ACE2)表达载体,并初步验证该表达载体的功能.方法:采用PCR方法,从载体pcDNA3.1-ACE2-3xFlag中扩增得到目的基因片段ACE2,用限制性内切酶XhoⅠ和AgeⅠ对载体质粒pQCXIP-mCherry-Lamp进行双酶切,回收得到线性化载体后与扩增的ACE2片段同源重组,得到目的载体pQCXIP-ACE2-mCherry.测序成功后,将构建的pQCXIP-ACE2-mCherry重组质粒及表达SARS-CoV-2的S蛋白的质粒pSec-SARS-CoV-2-S同时瞬时转染293T细胞,48 h后通过活细胞拍摄观察胞膜融合现象,Western印迹检测蛋白表达.结果:构建了表达人ACE2蛋白以及荧光标记蛋白mCherry的真核表达载体pQCXIP-ACE2-mCherry,与pSec-SARS-CoV-2-S共转染293T细胞后胞膜发生融合.结论:通过同源重组技术构建了载体pQCXIP-ACE2-mCherry,其研究思路可供SARS-CoV-2病毒研究借鉴.