柯萨奇B1病毒VP1基因片段原子力显微镜成像分析

摘要

用原子力显微镜(AFM)观察线性DNA并探讨其成像条件.用RT-PCR技术扩增柯萨奇B1病毒VPI基因DNA片段,纯化回收后配制成含和不含1 mmoL/L MgCl2的水溶液,DNA终浓度为100μg/ml.分别取20μl滴加在新鲜解理的云母片上,吸附1 min,用滤纸吸去残液,氮气吹干,在室温下采用MultiMode AFM NanoscopeⅢa的敲击模式成像.同时比较新制备的和多次使用过的探针所获得图像的质量,对两种探针进行扫描电镜观察.电泳证明获得了0.83kb的VPI基因DNA线性片段.Mg2+存在时,DNA在云母片上吸附延展较好,所获图像质量优于无Mg2+时.新制备的探针较多次使用过的探针所获图象分辨率更高.DNA分子的表观宽度为18±2.9 nm,高度为0.8+-0.2 nm.说明AFM能以高分辨率直接观察DNA分子,Mg2+的存在和高质量的探针有助于获得理想的图象.