耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a转肽酶区的克隆表达及纯化鉴定

摘要

目的:对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)转肽酶区的mecA基因片段进行克隆、表达、纯化及鉴定.方法:根据基因文库登录的mecA基因的编码序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,应用PCR技术从MRSA基因组DNA中扩增获得编码PBP2a转肽酶区的DNA片段,将此目的基因片段克隆至pET-His载体,经酶切鉴定、测序正确后,转化E.coli BL21(DE3)plysS;用IPTG进行诱导表达后,利用Ni2+亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白;对表达的蛋白以MRSA胶乳凝集试剂盒进行鉴定.结果:成功构建了PBP2a转肽酶区原核表达载体,并获得了高效表达,制备了高纯度的目的蛋白.结论:获得了高纯度的PBP2a转肽酶区蛋白,为其进一步研究奠定了基础.