用聚乙烯亚胺反向转染siRNA表达盒进行RNA干扰的研究

摘要

目的:建立适用于大规模RNA干扰(RNAi)筛选的siRNA生成与导入技术.方法:以绿色荧光蛋白(GFP)为模型,用PCR方法生成了包含U6启动子、互补的反义链和正义链以及终止序列的特异性siRNA表达盒(SEC),对聚乙烯亚胺(PEI)介导的转染SEC的方法及其效率进行研究.结果:PEI对细胞的毒性呈剂量依赖关系,当PEI与DNA的N/P=7.53,即PEI与DNA等量时,转染效率达到最高.PEI与脂质体LipofectAMINETM2000的转染效率无显著差异(P＞0.05),对SEC的转染效率显著高于质粒载体(P＜0.01).反向转染的转染效率显著高于常规转染(P＜0.01).利用PEI将表达GFP特异性siRNA的SEC反向转染可稳定表达GFP的HeLa细胞株(HeLa-EGFP),荧光染色和Western印迹检测均表明可显著抑制GFP的表达.结论:PEI介导的SEC反向转染具有简便、快捷、经济的优点,可满足大规模RNAi筛选的需要.