结核分枝杆菌抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

摘要

目的:建立2种结核分枝杆菌(Mtb)抗体的双抗原夹心ELISA检测方法,并初步评价其在Mtb血清学临床辅助诊断中的应用价值.方法:采用Mtb融合抗原38kD+ESAT6+CFP10作为包被抗原,分别以辣根过氧化物酶(HRP)和生物素(Bio)标记的38kD+ESAT6+CFP10作为标记抗原,建立2种Mtb双抗原夹心ELISA法,即HRP-ELISA法和Bio-ELISA法;采用所建立的2种方法对结核患者和健康对照血清进行检测.结果:经过一系列的反应条件优化,确定HRP-ELISA法和Bio-ELISA法的最佳抗原包被浓度分别为2、0.25 μg/mL,最适加样量均为100μL血清原液,最佳标记抗原稀释率分别为1:500、1:2000,检测的灵敏度分别为43.66％、52.11％,特异性均为100％.结论:建立了2种Mtb双抗原夹心ELISA法,它们均适用于Mtb血清学的临床辅助诊断.