具有长期感应尿酸浓度功能的稳定细胞系的构建与鉴定

摘要

目的:利用合成生物学方法构建具有尿酸感应作用的基因回路,稳定转染细胞系,构建长期自发稳定感应尿酸浓度的细胞系p-HucO8-SEAP-mUTs.方法:以耐辐射型球菌R1基因组中转录抑制物基因hucR及其结合位点基因hucO为基本元件,人工合成优化的转录抑制物基因mUTs及其结合位点的8串联结构基因hucO8,将mUTs和hucO8作为已知功能的生物模块,用于完成基因回路的构建,并稳定转染HepG2细胞;通过实时定量PCR检测稳定细胞系中目的基因表达的稳定性,通过检测分泌型碱性磷酸酶(SEAP)的表达量来验证对尿酸的感应作用回路及其长期可逆性.结果和结论:构建了p-HucO8-SEAP-mUTs稳定细胞系,稳定株不同代数之间目的基因的表达稳定;p-HucO8-SEAP-mUTs稳定细胞系能有效地反映环境中的尿酸浓度,且比瞬时转染细胞系更加敏感,可逆性良好,没有明显的“记忆效应”.