人自噬相关蛋白ATG7的原核表达及纯化鉴定

摘要

目的:原核表达并纯化自噬相关蛋白ATG7,初步鉴定其生物学活性.方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG7基因的编码序列,插入载体pET-28a(+)得到重组质粒,经BamH Ⅰ和NotⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate菌株进行小量诱导,纯化融合蛋白His-ATG7,通过Western印迹和SDS-PAGE检测融合蛋白的纯化效果.结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约2031 bp的目的片段,插入载体pET-28a(+)后构建出His-ATG7重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;转化大肠杆菌Rossate并进行小量诱导,纯化后SDS-PAGE检测显示获得相对分子质量约为78×103的融合蛋白.结论:纯化得到原核系统表达的His-ATG7融合蛋白,为后续研究ATG7在自噬中的作用机制奠定了实验基础.