高通量检测戈谢病和尼曼匹克病A/B型的超高效液相色谱-串联质谱法的建立

摘要

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术测定干血滤纸片中酸性葡萄糖脑苷脂酶(ABG)和酸性鞘磷脂酶(ASM)活性的方法.方法 将干血滤纸片样本提取液与酶作用底物和内标的混合溶液孵育过夜,反应液经萃取、氮气吹干及复溶后采用UPLC-MS/MS检测产物浓度及内标,计算酶活性.评价该方法的线性、精密度和准确性.结果 UPLC-MS/MS测定ABG和ASM活性的批内、批间精密度为3.6％～8.4％,批内、批间准确度为101％～ 115％.正常新生儿中ABG和ASM活性呈偏态分布(P＜0.01),以第0.5～ 99.5百分位数法确定ABG及ASM活性的参考区间分别为5.52～49.50和2.02～ 15.44 μmol·L-1·h-1.经临床验证,UPLC-MS/MS能有效检出戈谢病(GD)或尼曼匹克病A/B型(NPA/B)患儿,检出率为100％.结论 UPLC-MS/MS能同时测定干血滤纸片中ABG、ASM活性.该法快速、特异,可用于新生儿中GD、NPA/B的高通量筛查及临床检测.