流式微球检测超敏C反应蛋白方法学的建立及性能评价

摘要

目的 建立流式微球分析技术(CBA)检测人血清中超敏C反应蛋白(hs-CRP)的方法并对其进行系统性评价.方法 将hs-CRP鼠抗人单克隆抗体包被在已激活的羧基化聚苯乙烯微球上,用正交试验对试验条件进行优化选择,并应用美国临床实验室标准化协会的有关规则进行方法学评价.结果 试验选择hs-CRP鼠抗人单克隆抗体的加入量为10 μg,生物素标记的羊抗人单克隆抗体的稀释倍数为1∶540,第一次反应时间为2 h、洗涤2次,PE标记亲和素的稀释倍数为1∶1 000,第2次反应1 h洗涤1次.方法学评价显示,CBA检测hs-CRP的分析灵敏度为0.03 ng/mL,线性范围为0.03～333.33 ng/mL,批内变异系数为2.70%～4.44%,批间变异系数为4.99%～9.52%,准确度相对偏倚为2.17%～4.39%,回收率为98.31%～104.60%.高浓度的三酰甘油、胆固醇和胆红素对3种因子有一定的干扰率,低浓度的三酰甘油、胆固醇和胆红素对3种因子干扰较小.分别与免疫荧光方法比较差异无统计学意义.结论 自建的hs-CRP流式微球检测技术性能指标满足公认的质量指标,可拓展流式细胞分析技术,值得临床推广使用.