流式微球联合检测炎症性因子IL-6、TNF-α和MCP-1方法学的建立

摘要

目的 建立流式微球联合检测技术检测人血清中IL-6、TNF-α和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的方法并对其进行性能评价.方法 以包被在3种羧基化聚苯乙烯微球上的IL-6、TNF-α和MCP-1单克隆抗体作为捕获抗体,相应的生物素化单克隆抗体作为检测抗体,用双抗体夹心法检测血清标本中的IL-6、TNF-α和MCP-1含量.用正交试验对试验条件优化选择,用CLSI的有关规则进行方法学评价.结果 检测IL-6、TNF-α、MCP-1的线性范围分别为1.52～3 333.33 pg/mL、1.52～1 111.11 pg/mL、4.57～3 333.33 pg/mL；灵敏度分别为1.13pg/mL、1.07 pg/mL、2.52 pg/mL；低值、高值批内变异系数(CV)分别为1.98％和2.31％、2.90％和2.67％、2.92％和2.63％；批间CV分别为3.52％和4.17％、4.91％和4.27％、4.23％和3.70％；准确度相对偏倚分别为2.19％ ～ 3.66％、1.85％～2.53％、3.06％ ～5.15％；回收率分别为95.4％～101.5％、97.3％ ～ 104.2％、95.2％ ～104.3％;三酰甘油、胆固醇和胆红素对本法基本无干扰；本法与Flow Cytomix试剂盒检测结果无显著差异.用本法检测血清中IL-6、TNF-α、MCP-1参考值分别为2.68 ～6.16 pg/mL、4.10 ～ 8.80 pg/mL、23.27～82.73pg/mL.结论 流式微球联合检测血清IL-6、TNF-α、MCP-1的分析性能良好,可实现IL-6、TNF-α、MCP-1的联合检测.