反义锁核酸体外抗乙肝病毒的实验研究

摘要

目的 探讨锁核苷酸(LNA)修饰的反义寡核苷酸抑制乙型肝炎病毒(HBV)表达的效果及其抗HBV作用的特点.方法 针对HBV S基因同一靶位分别合成三段不同化学修饰的反义寡核苷酸:锁核酸修饰、未修饰和全硫代修饰,并以无关序列为对照直接作用于HepG22.2.15细胞,ELISA法动态检测细胞上清液中HBsAg含量;实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测细胞上清中HBV DNA含量;MTT法监测细胞活性.结果 针对HBV S基因的反义LNA能显著抑制HepG22.2.15细胞表达HBsAg(P＜0.05)且第3天出现抑制高峰,抑制作用随时间延长逐渐减弱.反义锁核酸组对HBsAg及细胞内、细胞外HBV DNA均有较强抑制作用,最高抑制率分别为51.19%、56.73%、86.9%,与其他实验组相比差异有统计学意义(P＜0.05),与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);LNA在20 μmol/L浓度范围内对细胞代谢无影响.结论 针对S基因的反义LNA体外能发挥高效、特异、低毒的抗HBV作用,为乙型肝炎的基因治疗注入了新的思路.