三硝基苯磺酸诱导急性肠纤维化大鼠模型的改良方法

摘要

目的探索2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导急性肠纤维化大鼠模型的方法及不同药物配比的效果。方法30只雌性SD大鼠随机分为5组,每组各6只。A~D组为模型组,模型组大鼠采用不同配比的药物溶液通过改良保留灌肠法一次性造模:A组,5%TNBS+50%乙醇(体积比1∶1);B组,5%TNBS+75%乙醇(体积比1∶1);C组,5%TNBS+100%乙醇(体积比1∶1);D组,5%TNBS+50%乙醇(体积比2∶1);对照组用生理盐水(0.9%氯化钠溶液)灌肠;观察造模后1周内动物的症状、体征和体质量变化,并进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分。分别于造模后7 d和14 d,随机选择每组内一半大鼠进行取材,观察结肠组织大体损伤程度并以结肠炎损伤指数(colon macroscopic damage index,CMDI)评分;结肠组织病理切片以HE染色观察肠炎严重程度,Masson染色观察胶原纤维沉积情况。结果各模型组大鼠均出现轻重不等的肠炎及肠纤维化病变,其中以体积比为1∶1的5%TNBS+75%乙醇溶液造模观察期内未导致大鼠死亡,造模后24 h大鼠体质量明显下降、出现稀便及血便症状,结肠壁纤维化病变明显,体质量下降、DAI评分与CDMI评分升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);光学显微镜下炎症程度较重,呈透壁性;Masson染色显示造模部位的肠壁增厚明显,黏膜下层、肌层及浆膜层均出现弥漫性胶原纤维沉积。结论改良的TNBS保留灌肠法能有效构建肠纤维化大鼠模型,体积比为1∶1的5%TNBS+75%乙醇溶液所建模型可模拟克罗恩病纤维化两大特征,即透壁性炎症和肠壁纤维化。该造模方法简便、高效,动物死亡率低。