绿脓杆菌外毒素A单链抗体基因的制备及其克隆的研究

摘要

为制备中和活性较高的单抗细胞2F6的单链抗体(ScFv)基因,以绿脓杆菌外毒素A(PEA)类毒素为免疫原,用单克隆抗体技术制备可分泌具有中和活力单克隆抗体的杂交瘤细胞,再应用RT-PCR从其中一株杂交瘤细胞中扩增出抗体VH和VL基因,用Linker(G4S)3将VH和VL基因连接成ScFv基因,并将其克隆至pGEM-T载体中.经核酸序列分析证实,VH、VL和Linker基因连接正确,基因全长729bp.经计算机分析VH、VL基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因的特征.VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ(A)和轻链κⅥ家簇.