20-HETE对大鼠心肌缺血再灌注损伤中NADPH氧化酶活性及ROS生成的影响

摘要

目的探讨20-HETE加重大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的作用及机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(Con组),缺血再灌注模型组(IR组),IR+20-HETE合成酶抑制剂(HET0016)组,Con+HET0016组,每组12只,通过Langendorff灌流系统建立大鼠离体心肌缺血再灌注模型,全心缺血35 min再灌注40 min,Power Lab/8P系统实时监测心肌力学指标;灌流结束后取心肌组织TTC法检测心肌梗死面积;DHE荧光探针法检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量;Western blot检测NADPH氧化酶亚基p47^(phox)磷酸化水平;细胞色素C的还原法检测NADPH氧化酶活性。结果离体心脏缺血再灌注后,加入20-HETE合成酶抑制剂HET0016(1μmol/L)后明显改善了IR导致的心肌力学指标下降,LVDP由IR组的(48.6±3.4)%升至(71.7±3.5)%,+d P/dt_(max)由(51.9±2.1)%升至(69±3.2)%,-d P/dt_(max)由(47.1±3.6)%升至(64.1±3.8)%(P<0.05);IR+HET0016组心肌梗死面积比IR组减小了37.2%(P<0.05)。DHE荧光探针检测发现IR+HET0016处理组心肌组织中ROS含量比IR组降低了45.8%(P<0.05);最后通过对NADPH氧化酶活性检测发现,HET0016显著减少了IR引起的NADPH氧化酶p47^(phox)亚基磷酸化水平及全酶活性的升高(P<0.05)。结论 20-HETE通过激活NADPH氧化酶诱导过量ROS的生成,加重心肌缺血再灌注损伤。